对于样本,怎么采集?怎么送检?首先,所送检的样本应该是新鲜的、干净的、典型的。尤其在临床中,如果要送检发病猪的病料,应该选取临床发病比较典型的病例,最好能够代表整个动物发病的特点。选1~2头剖解,采集病变比较典型的组织,以淋巴结、脾脏、肺脏、肾脏、血清、扁桃体为主,同时也可以采集流产胎儿以及脐带血。如果要进行抗体监测,我建议全群采样,以进一步了解抗体在不同猪群中的消长情况。
这其中有这样的建议(见表1):对于公猪,全群的每一头都采,可以检测猪瘟、伪狂犬、猪蓝耳、圆环、细小、乙脑的抗体;对于后备母猪,在混群之前,可以采样,检测猪瘟、伪狂犬、猪蓝耳、圆环;对于妊娠母猪,在分娩前四周,可以进行猪瘟、伪狂犬、圆环、口蹄疫、细小、乙脑、流行性腹泻的检测;对于哺乳母猪,分娩后两周,可以进行猪瘟、伪狂犬、圆环、口蹄疫、细小、乙脑的检测;对于断奶仔猪,可以选择25~30日龄,进行猪瘟、伪狂犬、蓝耳、圆环的检测;对于保育猪,可以选择55~60日龄进行猪瘟、伪狂犬、蓝耳、圆环和口蹄疫的检测;对于育肥猪,可以选择90~120斤,或者150厘米的猪,也是检测猪瘟、伪狂犬、蓝耳、圆环、口蹄疫等项目。对于后备母猪、妊娠哺乳母猪、断奶仔猪、保育猪、育肥猪,一般采样数≥10个,一年检测3~4次。
表1 不同生产阶段猪的采样及检测
生产阶段 |
采血时间 |
采血数 |
频次 |
检测项目 |
公猪 |
全采 |
一年 3-4次 |
猜瘟、伪狂犬(gB、gE)、蓝耳、圆环、细小、乙脑 |
|
后备母猪 |
混群前 |
≥10 |
猜瘟、伪狂犬(gB、gE)、蓝耳、圆环 |
|
妊娠母猪 |
分娩前4周 |
≥10 |
猪瘟、伪狂犬(gB、gE)、蓝耳、圆环、口蹄疫、细小、乙脑、流行性腹泻 |
|
哺乳母猪 |
分娩后2周 |
≥10 |
猪瘟、伪狂犬(gB. gE)、蓝耳、 圆环、口蹄疫、细小、乙脑 |
|
断奶仔猪 |
25-30日龄 |
≥10 |
猪瘟、伪狂大(gB、gE)、蓝耳、圆环 |
|
保育猪 |
55-60日龄 |
≥10 |
猪瘟、伪狂大(gB、gE)、蓝耳、圆环、口蹄疫 |
|
育肥猪1 |
90-120日龄 |
≥10 |
猪瘟、伪狂大(gB、gE)、蓝耳、 圆环、口蹄疫 |
|
育肥猪2 |
150日龄 |
≥10 |
猪瘟、伪狂大(gB、gE)、蓝耳、 圆环、口蹄疫 |
具体到要采多少头份,可以根据存栏母猪来计算(见表2):一般存栏母猪100头,母猪采10头,其他仔猪、保育猪、育肥猪,可以采12头;存栏500头的,母猪是采12头,仔猪、保育猪、育肥猪各35头;存栏1000头的,母猪是采15头,仔猪、保育猪、育肥猪可以采18头;存栏3000多的,母猪是采20头,其他的可以采25头;对于100头以下的,可以参考100头来采样;3000头以上的,可以参考3000头的采样。
表2 采样头数计算方式
存栏母猪 (头) |
||||
母猪 |
仔猪 |
保育猪 |
育肥猪 |
|
100 |
10 |
12 |
12 |
12 |
500 |
12 |
15 |
15 |
15 |
1000 |
15 |
18 |
18 |
18 |
3000 |
20 |
25 |
25 |
25 |
备注:100头以下可以参考100头采样;3000头以上可以参考3000头采样。
对于血液,目前主要检测的是抗体。血液采集,一般需要采3~5毫升,采完之后,把相应的注射器平放静置15~20分钟,等血液凝固之后送检,有条件的单位可以分离血清,放到4~8度保存,之后送检。送检就涉及到运输,建议冷藏运输。当然在运输之前,需要包装,最好是用泡沫箱,泡沫箱中需要放冰袋。根据运输时气温情况以及运输的时间长短,加入足够的冰袋,防止在运输过程中样本出现腐败。同时,要登记样品及猪场的信息,包括猪厂的厂名、样品的数量、送检人、免疫程序、最近免疫情况、临床的表现、用药情况等。把登记的纸张和病料,一块送到实验室。
当然,对重点采样部位,应该每次都要采集,包括肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结、肺脏、扁桃体,同时根据不同的目的采取侧重点不同的各类样本。这里涉及的内容比较多,我给大家简单总结一下(见表3):对腹泻类的病原,建议,一定要采粪便及相应的肠道(包括肠系膜淋巴结);对于呼吸系统的疾病,可以采肺脏,淋巴结;对于繁殖障碍的疾病,可以采流产的胎儿,包括其他的组织。
表3 不同疾病的采样部位
病名 |
建议采集的病料 |
猪瘟 |
扁桃体、脾脏、肾脏、淋巴结、血样 |
伪狂犬病 |
神经组织、扁桃体、血样 |
猪繁殖与呼吸综合征 |
肺脏、血样、流产胎儿、淋巴结 |
猪圆环病毒感染 |
肺脏、淋巴结、脾、肾脏、血样 |
猪细小病毒病 |
死胎、母猪血样、扁桃体 |
传染性胃肠炎/轮状病毒/流行性腹泻 |
空肠、肠系膜淋巴结、粪便 |
Kobuvirus/Bocavirus腹泻病毒 |
空肠、粪便 |
猪增生性肠炎 |
回肠、粪便 |
副猪嗜血杆菌病 |
肺脏(带气管)、心包液、关节、脑 |
链球菌病 |
肺脏(带气管)、脑、淋巴结、关节 |
传染性萎缩性鼻炎 |
肺脏(带气管)、深部鼻液 |
猪肺疫 |
肺脏(带气管)、淋巴结 |
猪传染性胸膜肺炎 |
肺脏(带气管) |
猪沙门氏菌病 |
肺脏(带气管)、肝脏、肠内容物 |
大肠杆菌病 |
小肠及内容物、肺脏、心脏 |
附红细胞体病 |
新鲜血液 |
弓形体病 |
抗凝血液、肺脏 |
通过血液方面可以检测它的抗体,另外,如果猪有病毒血症,还可以检测病原。目前可以通过两类技术采血:
一是可以通过猪的耳静脉来采,猪的耳静脉应该说还是比较明显,一般就在耳缘周围地方进针,一般逆着血流方向都可以采血。但是这种方法有缺陷,就是采血量不是很大,采血过程中可能会跑针。所以我想给大家建议比较好的采血方式,就是可以通过猪的前腔静脉来采血。静脉是在猪的脖颈下面,血管比较粗,在采血过程中出血比较快,出血量也比较大。具体操作过程:如果说是母猪,在限位栏中,可能会更好采集,先用保定绳来保定,之后有人在脖颈下面就能操作;如果是育肥猪,需要2~3个人来配合1个人保定,用保定绳穿过猪的上颌,把它的头提起来,然后保定人可以骑在猪的身上,或者是在侧方保定,让猪的屁股来顶着墙,另外一个人就可以抽血,或者说同时有几个人保定前腿和后腿,然后通过前腔静脉来采取。在临床中,我也建议大家用这样的方式来采血。
另外,请注意:对于母猪的抗体或病原的检测,有时候可以通过收集脐带血来进行,这在临床中要比通过耳静脉或者是前腔静脉采血更容易些。