肉兔人工授精技术操作规程

   liyuqin0314   吉山花瑶    2018-10-21 20:15:49
【导读】肉兔人工授精技术操作规程1 配套仪器设备(1)采精设备:塑料杯、集精杯、兔用胶皮假阴道、凡士林。(2)镜检设备:显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸。(3...

肉兔人工授精技术操作规程

1 配套仪器设备

(1)采精设备:塑料杯、集精杯、兔用胶皮假阴道、凡士林。

(2)镜检设备:显微镜、载玻片、盖玻片、擦镜纸。

(3)保温设备:恒温水浴锅(35℃-38℃、保证取出精液的温度)、恒温烘箱、双制冷电子冰箱(可根据需要调温、精液保温运输)。

(4)稀释液:精液稀释液粉剂,用双蒸水稀释。

(5)输精设备:兔用输精枪、输精枪套管。

(6)其它:蒸馏器、酒精棉、温度计等设备。

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2 种兔前期准备

2.1 种母兔准备

种母兔配种前要进行催情处理,其催情方法:一是兔舍光照,其强度为开灯后把手放入兔笼内能看清掌纹,时间为每天光照 18 小时以上;二是用药物催情(催情散或孕马血清)。

初产种母兔:配种前用催情散拌料饲喂(1 包催情散拌料 20kg 饲料),连续补充光照 3-5d,当母兔外阴大红时进行配种。

经产种母兔:母兔产仔后 23d 开始,连续补充光照 5 天至仔兔断奶,仔兔断奶当天给母兔注射孕马血清促性腺激素,按 0.3mL/ 只注射,注射后 2d 内观察母兔外阴,当外阴为大红时进行配种。

2.2 采精器准备

采精器包括塑料杯外壳、兔用胶皮假阴道内胎和集精杯三部分。将集精杯放入内胎的孔中,再将内胎塞入外壳中,集精杯露出外壳,另一端的集精杯开口处向外翻转套在外壳上、扎紧,使其不漏水、不透气,并经消毒处理。然后从外壳后部缓慢注入50℃温水。采精器准备好后,放入 54℃的双制冷电子冰箱内,然后带入种兔舍准备采精。

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3 精液采集

3.1 抓种兔

挑选体质健壮、性欲旺盛的公兔,左手抓诱导母兔耳朵及颈皮,右手拿假阴道及套在假阴道上的集精杯,伸到母兔腹下。

3.2 采精

公兔阴茎进入假阴道后,抽动数秒后向前一挺,后驱蜷缩向一侧倒去,伴随咕的一声,表示射精完成。采精者立即将假阴道口端抬高,使精液流入集精杯。然后迅速把采精器从母兔腹下取出,竖直采精器,取下集精杯,放入 36℃双制冷电子冰箱内。做好记录,待检测和稀释处理。

肉兔人工授精技术操作规程

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4 精液检测

4.1 送检

采精结束立即把双制冷电子冰箱送回化验室,把集精杯连同试管架放入 36℃恒温水浴锅中。取干燥清洁载玻片,用胶头滴管吸取一滴精液涂于载玻片上,至于 160 倍显微镜下进行镜检。

4.2 品质检测

一是外观观察:肉眼观察精液颜色(正常为灰白色或乳白色)、精液混浊度(似云雾滚动表示活力大、密度大),闻气味(无臭味);二是镜检观察:观察精子活力,活动力检查时,精液不能太少,精液过少容易风干,可加 1~2 滴精液于载玻片上,再加数滴稀释液,观察精子运动,保证精子中有3/5 以上的精子呈前进式运动才能用于精液稀释和输精。

5 精液稀释

5.1 稀释倍数

按检测的精子活力分值选择合适的稀释倍数。具体分值和稀释倍数如表 1。

表 1 精子分值和稀释倍数

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5.2 精液稀释剂的配制

取一包精液稀释剂粉, 使其完全溶解在 100mL双蒸水中。双蒸水温度 36℃,盛放稀释剂的器皿使用双蒸水冲洗干燥后,可以使用双蒸水润洗一遍(双蒸水放置很长时间必须煮沸,排除二氧化碳,保持水的 pH 值)。

5.3 稀释

用玻璃棒引流,缓慢将配制好的精液稀释液沿集精杯壁流入精液中,然后轻轻摇匀。

5.4 保存

必须现配现用,同时要缩短从采精到输精的时间,可以有效的提高受孕几率。

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6 输精

6.1 抓种母兔

两人协同操作,助手一手抓母兔耳朵及颈皮,把母兔放到输精车上,另一手按住母兔背腰。输精者左手拇指与其余四指抓住母兔尾根向上提并外翻,母兔后躯悬空,外阴充分暴露。

6.2 输精手法

输精者右手持枪,用枪头拨开母兔外阴,沿阴道背部向下进枪,遇到阻力时,输精枪后退再试探性向前进,调整枪头角度,经产母兔枪头向下,初配母兔枪头向上,稍用力可过关。插入适宜深度 12-14cm,兔为双子宫动物,太深易单侧子宫受孕,过浅精子不能到达受精部位。

6.3 输精完成

输完精后,缓慢拔出输精枪,在母兔后躯轻拍一下。再注射经生理盐水稀释的促排 3 号 0.5 微克,刺激母兔排卵。

6.4 注意事项

(1)避免强制输精:当母兔挣扎,背腰拱起,后肢触及物体、努责时不可强制输精,以免给母兔造技术交流成损伤。

(2)严格消毒:输精枪在吸取精液前,用精液稀释液清洗两遍,甩净精液稀释液后再倒入精液,一次只倒 20mL,减少在输精过程中紫外线、温度及震荡等对精液的损伤。输精前排尽枪内空气,一支输精管只用于一只母兔。

(3)减少精液震荡:在输精过程中,减少对精液震荡,在震荡时精液中的 CO 2 溢出 O 2 溶入,使精子活动量增加,消耗精子能量,加快精子衰竭死亡。

(4)在操作室进行精液稀释时,工作人员严禁吸烟,烟气对精子具有很大的杀伤力。

7 输精后管理

7.1 保持兔舍安静

输完精后,为了更好的让母兔受胎,所有人员必须撤出兔舍,给母兔营造一个安静舒适的环境。在输精前加料以及采精前加料,要保证水料充足。

7.2 母兔摸胎

输精以后,仍保持每天 18h 光照,直至母兔摸胎,母兔在配种后 12~15d 进行摸胎,以确认母兔是否受孕。

表 2 肉兔人工授精器材目录(仅供参考)

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