樊晓旭:ASFv实验室诊断,需要避免交叉感染与控制假阳性结果

  
  • xiaoz   《国际猪业》  
  • 2019-04-02 18:02:00
    【导读】 【国际畜牧网】通过临床症状和病理变化,无法对ASF与猪瘟(CSF)进行鉴别,而且还需要对ASF、CSF与其他急性出血性猪病进行鉴别。在北京举行的2019国际猪业科学论坛上,中国动物卫生与流行病学中心樊晓...

    【国际畜牧网】通过临床症状和病理变化,无法对ASF与猪瘟(CSF)进行鉴别,而且还需要对ASF、CSF与其他急性出血性猪病进行鉴别。在北京举行的2019国际猪业科学论坛上,中国动物卫生与流行病学中心樊晓旭博士在《中国非洲猪瘟的诊断》的主题报告中表示,对于非洲猪瘟而言,用可靠的实验室诊断显得非常重要。

    樊晓旭:ASFv实验室诊断,需要避免交叉感染与控制假阳性结果

    樊晓旭:ASFv实验室诊断,需要避免交叉感染与控制假阳性结果


    中国动物卫生与流行病学中心    樊晓旭博士

    “基于实验室检测,我们不但可以分析一些疑似感染ASFv案例,而且可以确诊一些ASFv感染案例,这对进一步控制ASFv传播非常重要。”樊晓旭分析说,由于ASF没有疫苗,目前实验室诊断方法以检测特异性抗体为主。其他的方法,“可采用病毒分离法,或者通过检测病毒核酸(基因组DNA)的方法,如常规PCR(聚合酶链式反应)、荧光PCR,还可以采用ELISA(酶联免疫吸附试验)来检测血清抗体,如iELISA(间接阻断酶联免疫吸附试验)和bELISA(阻断酶联免疫吸附试验)。此外,通过采用双重PCR方法,可以区分非洲猪瘟与传统猪瘟。”

    “我们开发了快速qPCR检测方法、RPA(重组酶聚合酶扩增)方法来对ASFv进行检测。我们还开发了一些商业用iELISA测试包,来对ASFv抗体进行检测。”樊晓旭强调说,“由于采用PCR和qPCR类检测试剂敏感性非常高,同时会受抑制剂影响,如果核酸被破坏,可能会出现一些假阳性的检测结果;再者,如果样品质量不够好,也可能会出现一些假阳性的检测结果。”

    “我们确定ASFv是阳性、阴性,还是可疑,重要的是需要避免交叉感染以及控制假阳性结果的出现。在交叉污染过程当中,比如ASFv阳性样本或者说在DNA提取过程当中的一些阳性控制,则显得尤为重要。”樊晓旭表示,中国首例ASF疫情发生后,中国动物卫生与流行病学中心通过对来源于此次疫情2头病死猪的样本B646L/p72 基因片段普通PCR产物进行正反向测序并绘制遗传进化树。分析结果显示,此样本病毒属于基因II 型,与目前在俄罗斯和东欧流行的格鲁吉亚毒株(Georgia 2007)同属于一个进化分支,提示疫情可能来自俄罗斯和东欧疫情国家。

    樊晓旭称,中国加强了对非洲猪瘟病毒的检测,除非得到农业农村部的支持,否则不允许进行任何的病毒分离和动物感染。截至目前,全国已确定29个确诊实验室可以及时确诊ASF疫情。

    对于ASFv检测而言,实验室的安全性至关重要。“我们要保证相关工作人员的健康,并要让相关环境方面也要能够满足要求,同时还需要消除一些潜在风险。如,在我们实验室里,不允许吃东西、喝水、吸烟以及涂抹唇膏等化妆品。”樊晓旭说,“在对不同样本进行处理时,需要采取区域分离措施,比如进行ELISA和PCR检测适需要分开,在不同区域进行操作。”


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