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猪链球菌灭活苗的免疫攻毒保护试验

     网络  2012-03-08 20:37:44
【导读】 摘 要:为检验猪链球菌灭活疫苗(猪链球菌2型+马链球菌兽疫亚种)免疫效果,研制了5批疫苗,对妊娠母猪、保育猪等进行免疫攻毒试验,检验疫苗的主动免疫和被动免疫效果,结果表明,对哺乳仔猪的平均保护率达到88.09%(SS2)和79.06%(SeZ...
 摘 要:为检验猪链球菌灭活疫苗(猪链球菌2型+马链球菌兽疫亚种)免疫效果,研制了5批疫苗,对妊娠母猪、保育猪等进行免疫攻毒试验,检验疫苗的主动免疫和被动免疫效果,结果表明,对哺乳仔猪的平均保护率达到88.09%(SS2)和79.06%(SeZ),对保育猪的平均保护率达到90%(SS2)和76.7%(SeZ)。 关键词:猪;链球菌;疫苗;免疫效果
猪链球菌病由多种猪源链球菌引起,临床表现为急性败血症、关节炎、脑膜炎及急性死亡,是猪的主要传染病之一。近年来猪链球菌病在我国流行日趋严重,病原亦发生变化,其中最为重要的是猪链球菌2型呈世界范围分布,是一种人兽共患病原菌,该病曾先后在江苏南通、四川资阳等地引发公共卫生事件,造成极大的社会恐慌,严重危害养猪" 养猪业的发展和人民的身体健康[1]。摸清该病的流行规律,阐明致病机理,建立快速检测方法,研制高效安全、针对性强的猪链球菌疫苗,解决生产实际问题已成为迫切需要。
由上海市动物疫病预防控制中心、南京农业大学组成的课题组自1998年以来,对我国猪链球菌病进行了系统地研究,并研制了猪链球菌灭活苗(猪链球菌2型+马链球菌兽疫亚种)[2­3]。本试验的目的是为了检验猪链球菌灭活苗实验室产品的免疫效果,为疫苗的大批生产及推广应用提供参考数据。
1 材料与方法
1.1 试验用动物
试验用健康母猪和21日龄健康仔猪由上海市两个种猪场" 猪场提供,两个猪场未接种链球菌疫苗,近两年也无链球菌病发生。15 g~20 g Balb/c小鼠购自上海复旦大学医学院。
1.2 试验用疫苗
实验室研制生产猪链球菌灭活疫苗(猪链球菌2型+马链球菌兽疫亚种)5批,批号分别为20000125、20001214、20010226、20010312、20010327。经纯检、细菌计数及无菌检查合格后用于试验[4­6]
1.3 攻毒菌株
C74­63马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi subsp.zooepidemicus,SeZ),属兰氏分群C群,购自中国兽药监察所;HA9801猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)分离株,1998年8月从江苏省急性败血症死亡猪的实质器官中分离[7],中国兽医药品监察所鉴定,上海市动物疫病预防控制中心保存。
1.4 免疫效力检验
1.4.1 小鼠效力检验 每批疫苗皮下注射15 g~20 g Balb/c小鼠20只,每只0.2 mL,15 d后加强免疫1次,每次0.2 mL,间隔14 d后,与对照小鼠10只,每组再分成2组(每组5只),分别用HA9801和C74­63攻毒,攻毒方法:腹腔注射2 LD50(5.5×102 cfu)剂量的C74­63强毒菌液,腹腔注射2 LD50(1.2×108cfu)剂量的HA9801强毒菌液。观察10 d。
1.4.2 仔猪效力检验 每批疫苗取妊娠母猪2头,分别于产前35 d~40 d和15 d~20 d各肌肉注射1次,每头3 mL。产仔后随机选出4头~5头仔猪人工哺乳作为对照。其余仔猪在吮食免疫母猪乳,仔猪3日龄时连同对照组,攻击2 LD50(4×107 cfu)剂量的C74­63强毒菌液、2 LD50(1.5×109 cfu)剂量的HA9801强毒菌液,观察10 d。
1.4.3 保育猪效力检验 20000125批疫苗肌肉注射21日龄健康猪20头,其他批次疫苗各接种10头,每头2 mL,20 d后加强免疫1次,免疫剂量及免疫途径与首免一样。间隔15 d后,连同对照组,攻击2 LD50(4×107 cfu)剂量的C74­63强毒菌液、2 LD50(1.5×109 cfu)剂量的HA9801强毒菌液,观察10 d。
2 结果
2.1 小鼠效力检验
Balb/c小鼠经5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327免疫接种试验后,用猪链球菌2型HA9801株和马链球菌兽疫亚种C74­63株攻毒,疫苗平均保护率分别为90%(45/50)、74%(37/50)对照组全部死亡或发病(表1)。
1 Balb/c小鼠的攻毒保护试验
Table 1 Protective test against Streptococcus in Balb/c mice

批次
Batch
组别
Groups
猪链球菌2型(SS2) 马链球菌兽疫亚种(SeZ)
试验数
Mice No.
发病数
Sick No.
死亡数
Dead No.
保护率/%
Protective rate
试验数
Mice No.
发病数
Sick No.
死亡数
Dead No.
保护率/%
Protective rate
20001214 免疫组Immunization 10 1 1 90 10 2 1 80
对照组Control 4 4 4 0 4 4 4 0
20010312 免疫组Immunization 10 2 1 80 10 3 2 70
对照组Control 4 4 3 0 4 4 4 0
20000125 免疫组Immunization 10 1 1 90 10 4 2 60
对照组Control 4 4 4 0 4 4 4 0
20010226 免疫组Immunization 10 0 0 100 10 1 1 90
对照组Control 4 4 3 0 4 4 4 0
免疫组Immunization 10 1 0 90 10 3 2 70
对照组Control 4 4 4 0 4 4 4 0
总计Total 50 5 3 90 50 13 7 74
  2.2 仔猪效力检验
哺乳仔猪经猪链球菌2型HA9801株和马链球菌兽疫亚种C74­63株攻毒后观察10 d,5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327的平均保护率分别为88.09%(37/42)、79.06%(34/43),对照组全部死亡(表2)。
2 哺乳仔猪免疫效力试验
Table 2 Immune efficacy test against Streptococcus in sucklingpiglets

批次
Batch
组别
Groups
猪链球菌2型(SS2) 马链球菌兽疫亚种(SeZ)
试验数
PigNo.
发病数
Sick No.
死亡数
Dead No.
保护率/%
Protective rate
试验数
PigNo.
发病数
Sick No.
死亡数
Dead No.
保护率/%
Protective rate
20001214 免疫组
Immunization
8 1 1 87.5 10 3 2 70
对照组
Control
2 2 2 0 2 2 2 0
20010312 免疫组
Immunization
7 1 0 85.7 8 2 1 75
对照组
Control
2 2 2 0 2 2 2 0
20000125 免疫组
Immunization
9 1 1 88.9 10 2 2 80
对照组
Control
2 2 2 0 2 2 2 0
20010226 免疫组
Immunization
8 1 0 87.5 7 1 0 85.7
对照组
Control
2 2 2 0 2 2 2 0
20010327 免疫组
Immunization
10 1 0 90 8 1 1 87.5
对照组
Control
2 2 2 0 2 2 2 0
  总计
Total
30 3 1 90 30 7 5 76.7
  2.3 保育猪效力检验
5批疫苗20000125、20001214、20010312、20010226、20010327免疫接种试验后,用猪链球菌2型HA9801株和马链球菌兽疫亚种C74­63株攻毒,疫苗对保育猪的平均保护率分别为90%(27/30)、76.7%(23/30),对照组全部死亡(表3)。
3 保育猪免疫效力
Table 3 Immune efficacy test against Streptococcus in nursing pigs

批次
Batch
组别
Groups
猪链球菌2型(SS2) 马链球菌兽疫亚种(SeZ)
试验数
Mice No.
发病数
Sick No.
死亡数
Dead No.
保护率/%
Protective rate
试验数
Mice No.
发病数
Sick No.
死亡数
Dead No.
保护率/%
Protective rate
20001214 免疫组Immunization 5 1 0 80 5 1 1 80
对照组Control 2 2 2 0 2 2 2 0
20010312 免疫组Immunization 5 0 0 100 5 1 0 80
对照组Control 2 2 2 0 2 2 2 0
20000125 免疫组Immunization 10 1 1 80 10 3 2 70
对照组Control 2 2 2 0 2 2 2 0
20010226 免疫组Immunization 5 0 0 100 5 1 1 80
对照组Control 2 2 2 0 2 2 2 0
20010327 免疫组Immunization 5 1 0 80 5 1 1 60
对照组Control 2 2 2 0 2 2 2 0
总计Total 30 3 1 90 30 7 5 76.7
  3 讨论
R群猪链球菌2型与C群马链球菌兽疫亚种是当前我国猪链球菌病的两种主要病原[7­8]。随着养猪业规模化程度的不断提高,同时由于近年来猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒2型感染等疫病的发生与流行,使猪链球菌病呈明显的上升趋势,严重威胁养猪业的发展[9­10]。国内已有商品化的C群马链球菌兽疫亚种弱毒疫苗,而猪链球菌病灭活苗(猪链球菌2型+马链球菌兽疫亚种)目前尚无产品面市。
本研究利用从江苏病猪体内分离的R群猪链球菌2型强毒株HA9801与C群马链球菌兽疫亚种强毒株ATCC35246,共制备了5批猪链球菌病灭活苗(猪链球菌2型+马链球菌兽疫亚种)。灭活疫苗二次免疫后用猪链球菌2型及其马链球菌兽疫亚种强毒攻击,对哺乳仔猪的保护率分别达到88.09%(37/42,SS2)和79.06%(34/43,SeZ),对保育猪的保护率分别达到90%(27/30,SS2)和76.7%(23/30,SeZ),表明灭活疫苗对哺乳仔猪、保育猪均有良好的免疫保护作用。用Balb/c小鼠进行了免疫攻毒保护平行试验,结果对小鼠的保护率分别达到90%(45/50,SS2)和74%(37/50,SeZ),与哺乳仔猪、保育猪显示了良好的一致性,表明猪链球菌灭活苗(猪链球菌2型+马链球菌兽疫亚种)的免疫效果良好。

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